Pembuatan
Kultur Murni (Parental) Jamur Tiram dengan Teknik Kultur Jaringan Menggunakan
Media PDA (Potatoes Dextrose Agar) bagian 1
Tahap 1:
Pembuatan Medium PDA
A.
Bahan bahan
yang diperlukan
- Kentang : 250 gram
- Dekstrosa : 20 gram
- Agar powder : 20 gram
- Air akuades : 1 liter
- Kapas secukupnya
B.
Alat-alat
- Cawan petri/botol kecil
- Autoclave atau panci presto
- Kompor
C.
Proses
pembuatan:
1.
Setelah dikupas, kentang selanjutnya di
potong-potong dengan ukuran ±1 cm3. kemudian di cuci bersih.
2.
Siapkan cawan petri atau bisa juga digunakan
botol-botol kecil yang berbentuk seperti botol whiskey. Cuci botol tersebut
hingga bersih. Akan lebih baik apabila botol tersebut disterilkan dengan cara
merebusnya ke dalam air mendidih.
3.
Kentang yang telah dicuci selanjutnya direbus dengan
air sebanyak 1 liter selama 15-20 menit.
4.
Setelah selesai, pisahkan kentang hasil rebusan
tersebut. Kemudian saring airnya hingga bersih. Apabila volume air kentang
tersebut berkurang tambahkan air lagi hingga menjadi 1 liter
larutan PDA.
5.
Larutan PDA (1 liter) kemudian dipanaskan
kembali sambil menambahkan dektrosa dan agar-agar secara perlahan hingga
terlarut sempurna.
6.
Setelah terlarut dengan baik, tuangkan larutan PDA
tersebut ke dalam botol sebanyak 1/4 volume botol.
7.
tutup botol tersebut dengan menggunakan kapas.
8.
Botol yang telah diisi media PDA selanjutnya
disterilisasi menggunakan autoclave atau panci presto selama 20- 30 menit.
9.
Setelah selesai, keluarkan botol tersebut dan letakkan
dalam posisi miring. Tujuannya untuk memperluas area dari media PDA sehingga
pertumbuhan miselium jamur akan lebih banyak. Usahakan kemiringan hingga media
PDA mendekati leher botol tapi tidak sampai menyentuh kapas pada tutup botol.
Sentuhan media PDA dengan kapas dapat menyebabkan kontaminasi.
Untuk meyakinkan apakah media PDA
ini terkontaminasi atau tidak biarkan selama beberapa hari kemudian perhatikan
apabila terdapat titik titik hitam maka besar kemungkinan media telah
terkontaminasi. Sebaliknya, apabila media terlihat bersih maka media PDA siap
untuk digunakan dan diinokulasi dengan bibit jamur tiram.
Pembuatan
Kultur Murni (Parental) Jamur Tiram dengan Teknik Kultur Jaringan Menggunakan
Media PDA (Potatoes Dextrose Agar) bagian 2
Tahap 2: Pembuatan
Kultur Jaringan
A.
Alat dan Bahan
·
Botol berisi PDA
·
Pinset
·
Pisau scalpel
·
Jarum jara
·
Lampu spirtus
·
Alkohol 70%
·
Kapas
·
Ruang isolasi / laminar Flow
·
Jamur tiram
·
Pemantik api
·
Label + spidol
·
Lampu ultraviolet yang dipasang di ruang
isolasi/laminar Flow
B.
Proses Pembuatan
1.
Pilih jamur yang baik dengan ciri-ciri
a.
sehat (bersih, tidak busuk ataupun terkontaminasi hama
atau jamur pengganggu),
b.
memiliki batang yang kuat,
c.
tidak terlalu tua artinya masih dalam masa
pertumbuhan, bisa dilihat dari tudungnya yang belum terlalu besar,
d.
jamur yang dipilih merupakan jamur yang tumbuhnya
tunggal (satu tangkai) tidak berkoloni (memiliki banyak tangkai)
2.
Bersihkan ruangan isolasi dan semua peralatan dengan
menggunakan alkohol kemudian masukkan semua peralatan yang telah dibersihkan ke
dalam ruang isolasi
3.
Nyalakan lampu UV di dalam ruang isolasi/laminar flow
selama 10-15 menit, setelah itu matikan. Lampu UV berfungsi untuk mematikan
bakteri-bakteri kontaminan
4.
Setelah peralatan siap, bersihkan kedua tangan dan
botol-botol PDA dengan alkohol
5.
Masukkan kedua tangan ke dalam ruang isolasi kemudian
pegang pisau skalpel/jarum jara seperti memegang sendok.
6.
bakar ujung jarum jara tersebut beberapa saat
dengan menggunakan lampu spirtus untuk membunuh kuman-kuman yang masih
menempel. Pastikan jarum jara tidak menyentuh permukaan setelah pembakaran
7.
Setelah jarum dingin, siapkan bagian kecil jamur
yang akan dikultur dengan cara menyobeknya menggunakan tangan
8.
Potong jaringan dari dalam jamur dengan menggunakan
jarum jara/pisau scalpel dengan ukuran 2 mm x 2 mm. Jaringan yang
dipotong kira kira terletak pada bagian tengah antara tudung buah dan batang.
9.
Siapkan botol PDA. Dekatkan dengan api untuk menjaga
dari kontaminasi (± 20 cm). Buka kapas penutup botol
10. secara
perlahan lahan masukkan/inokulasi jaringan jamur yang telah dipotong dengan
menggunakan jarum jara/pinset ke bagian tengah permukaan PDA.
11. Setelah
selesai tutup botol PDA segera dengan menggunakan kapas
12. Beri label
pada botol PDA dengan menuliskan keterangan-keterangan yang diperlukan seperti
tanggal inokulasi,jenis jamur dll.
13. simpan/inkubasi
di tempat yang bersih
14. lakukan
pengamatan secara berkala. Bila terdapat kontaminasi segera pisahkan dan
bersihkan.
15. Setelah
miselium memenuhi isi botol (2-4 minggu masa inkubasi) maka miselium siap
digunakan untuk membuat bibit F1/turunan pertama. Apabila tidak langsung
digunakan, botol-botol berisi miselium ini bisa diawetkan dengan menyimpannya
di tempat yang dingin/lemari pendingin
No comments:
Post a Comment